百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【产品名称】

通用名称：百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【包装规格】

96人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定性检测人血清/血浆或全血样本中的百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体。

适用于百日咳杆菌感染的辅助诊断以及人体内百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体的定性检测。

百日咳是由革兰氏阴性的百日咳杆菌引起的呼吸道传染病，主要表现为迁延数周的咳嗽，以有吸气性“尾声”的剧烈阵发性痉咳为特征，婴幼儿的临床表现最为严重。

百日咳的病原体为百日咳鲍特菌，是一种小的、 营养需求苛刻的革兰氏阴性球杆菌，专门附着在人呼吸道的粘膜层。有时，其他传染源， 尤其是副百日咳鲍特菌，也可引起百日咳样疾病。鲍特氏菌属可因环境条件改变而发生表型变化，毒力因子的表达也可不同。这些因子包括百日咳毒素（PT）、丝状血凝素 （FHA）、 百日咳粘着素 （PRN）、 菌毛 （FIM)2 型和 3 型、 腺苷酸环化酶毒素 （ACT)、气管细胞毒素（TCT）、脂低聚糖和百日咳鲍特菌内毒素。虽然百日咳的发病机制尚不完全清楚，但 FHA、PRN 和菌毛可帮助细菌粘附在宿主细胞上，PT、TCT 和 ACT 可使细菌破坏上皮层，并躲避宿主的免疫系统。这些都是重要的致病因素。

百日咳的病原体仅在发病早期患者的鼻咽部可以检出，经 9～10 天（范围：6~20 天）的潜伏期，患者出现卡他症状（包括咳嗽）。1～2 周内，出现阵发性痉挛性咳嗽，并带有特征性的鸡鸣样尾音。 典型表现是夜间咳嗽特别严重，咳后常伴有呕吐。在婴幼儿中，百日咳可引发呼吸暂停和发绀,但可无咳嗽；在青少年和成人中，非特异性的、经久不愈的咳嗽可能是惟一的临床表现。疾病的卡他期、 阵发期和恢复期可持续数月。虽然大部分临床上可辨别的百日咳病例发生在 1～5 岁的儿童，但报告的严重病例和死亡病例主要发生于出生后数周或数月。在大龄儿童、 青少年和成人中，由于其病程常常不典型，通常未被辨识为百日咳。

百日咳作为一种传染病，每2～5年（平均3～4年）出现一次流行高峰。儿童广泛接种疫苗和百日咳发病率的降低，并没有影响到百日咳的流行周期。其没有固定的季节流行模式，不同性别间存在一定差异，可发生在任何年龄。

实验室检测百日咳IgG抗体的方法主要有补体结合试验、凝集试验、毒素中和实验、酶联免疫实验（ELISA）等。

【检验原理】

试剂盒采用酶联免疫间接法原理。

本试剂盒系用纯化的百日咳类毒素和丝状血凝素混合抗原包被微孔板。样品加入微孔后，其中抗百日咳类毒素或丝状血凝素抗体与微孔中固相化百日咳类毒素和丝状血凝素混合抗原形成抗原-抗体免疫复合物，洗涤去除未结合物，加入辣根过氧化酶标记小鼠抗人IgG单克隆抗体，与复合物反应形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤去除未参与反应的酶结合物，加TMB底物显色，呈色的深浅与百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体的含量成正比。

【主要组成成份】

我公司不同批号、不同品种试剂盒中的相同组分不得混用。不可与其他厂家试剂混用。

【储存条件及有效期】

1. 于2~8℃冷藏、避光保存，禁止冷冻，有效期为12个月。

2. 未用完的预包被板应立即与干燥剂一起放入自封袋中密封，2~8℃环境中保存时间不得

超过一周。

3. 未用完的其他组份试剂应立即将瓶盖盖好， 置于2~8℃环境中保存，保存时间不得超

过一周。

4. 产品的生产日期及有效期至详见产品标签。

【适用仪器】

含450nm波长的酶标仪或全自动酶免分析仪。

【样本要求】

1. 人血清/血浆或全血均可用作测定样本。抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸钠）对样本检测结果无干扰。

2. 血清/血浆样品2～8℃冷藏保存可稳定4天，但建议在72小时内使用；全血样本即采即用；若需长期保存，血清/血浆样品可直接-20℃冷冻保存可稳定一年，全血样本可用样品稀释液稀释后吸出上清液，-20℃冷冻保存可稳定一年。冻存的样本冻融次数建议不超过3次。

3. 应避免使用溶血、脂血样本，不能使用被污染的样本。

【检验方法】

1.样品准备

1.1 先向1.5ml离心管中加入样品稀释液500μl。编号。

1.2 采集全血10μl，或吸取血清/血浆5μl，加入相应的离心管中，立即轻摇、混匀。

1.3 若为全血样品，将离心管置室温（或4℃冰箱）静置，待红血球全部沉降到孔底，取上清液检测；若为血清或血浆样品，混匀后即可使用。

2. 将试剂盒和样品从冷藏环境中取出，放置30分钟，平衡至室温；恒温箱或水浴锅调节至37±1℃。

3. 配制洗涤液：1倍体积的浓缩洗涤液加入19倍体积的蒸馏水、纯化水或去离子水，混匀。

4. 加样：每次试验设阳性对照1孔、阴性对照1孔，每孔加入相应的对照液100μl；设空白对照1孔，加样品稀释液100μl；其余每孔加入已稀释的样品（全血样品取上清液）100μl。贴上封口膜，置37℃温育60分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。有条件的可按上述洗涤条件设置参数，用洗板机洗涤。

5. 加抗人IgG抗体酶标记物：每孔100μl（空白孔不加）。贴上封口膜，置37℃温育30分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。

6. 显色：每孔加底物液A及底物液B各50μl，混匀。贴上封口膜，置37℃避光显色15分钟。

7. 测定：小心将封口膜揭掉，每孔加终止液50μl，混匀。30分钟内用酶标仪双波长450nm/630nm测定各孔OD值(使用单波长450nm时，必须以空白孔调零）。

【阳性判断值】

1. 阴性对照OD₄₅₀＜0.3，阳性对照OD₄₅₀≥0.6，试验成立。

2. Cut-Off 值 = 阴性对照OD₄₅₀值 × 2.1，S/CO值 =

0.9≤S/CO值＜1.1，判为可疑，建议重复检测；

S/CO值≥1.1，判为阳性；

S/CO值＜0.9，判为阴性。

【检验结果的解释】

1. 阳性结果：S/CO值≥1.1，表示样本中百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体为阳性。

2. 阴性结果：S/CO值＜0.9，表示样本中百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体为阴性。

3. 可疑结果：0.9≤S/CO值＜1.1，表示样本中百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体为处于临界值，建议重复检测或两周后再次检测，动态观察抗体水平的变化。

【检验方法的局限性】

仅用于人体内百日咳类毒素和丝状血凝素IgG抗体的定性检测。